關于BCA蛋白定量試劑盒說明書上的微型定量操作

發布日期： 2021-05-19

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　　BCA蛋白定量試劑盒是一種靈敏并且抗干擾能力強的蛋白定量檢測試劑盒。本試劑盒方便快捷，加入待測樣品1小時即可進行吸光度測定，對蛋白定量線性范圍在31.2-1000μg/ml之間，靈敏度≤31.2μg/ml。特別適合用于RIPA裂解液提取的細胞和組織蛋白樣品中的蛋白濃度測定。

　　1. 吸取25ul標樣或樣品分別加入到96孔板的各孔中。

　　2. 每孔加入200ul的BCA工作液。搖晃混勻30s，蓋住各樣品孔。

　　3. 標準檢測標準檢測：：在37°C孵育30min或室溫放置2–16h。加強型檢測加強型檢測加強型檢測：：在60°C孵育15min。

　　4. 冷卻至室溫。

　　5. 在562nm吸光值。

　　注意：如果光度計沒有配備562nm濾波片，波長在540–590nm范圍的都可以使用。

　　6. 校正的吸光值是將各標樣和試樣的讀數減去空白樣吸光值。

　　7. 比照已知BSA量制作的標準曲線讀取蛋白濃度。

　　注意：如果機器附帶提供標準曲線軟件可以幫助獲得精確的結果。

　　8. 參照標準曲線，根據各蛋白試樣的校正吸光值，在標準曲線的線性范圍內讀出各樣品的蛋白濃度。 9. 根據樣品體積和稀釋度計算原來樣品中的蛋白量。

　　標準型定量需要的蛋白樣品較多（50ul），這種情況下BCA工作液與蛋白樣品的體積比是20:1，干擾定量的物質的影響會較小；微型定量需要的蛋白樣品量較少（25ul），非常適合96孔板式的高通量操作。此種情況下BCA工作液與蛋白樣品的體積比是8:1，干擾定量的物質的影響相對會較大。